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梯度實驗常見的問題與解決方案

點擊次數(shù):1936 發(fā)布時間:2019-09-18
     梯度實驗常見的問題與解決方案
    *,做HPLC分析時梯度系統(tǒng)可以在縮短分析時間的同時而不影響樣品的分離,但是簡便的同時也伴隨著多種多樣的問題,就筆者個人總結(jié),常見的問題有三點:
    (1)兩相混合后產(chǎn)生氣泡
    緩沖鹽溶液與純甲醇走梯度產(chǎn)生的氣泡圖,對此我們公司通常的解決方法是使用“反壓調(diào)節(jié)器”使紫外檢測池有一定的壓力,阻止氣泡形成。其次通常我們不建議使用純的有機(jī)相如純甲醇,純乙腈作流動相。
    (2)梯度基線漂移問題
    此問題一般發(fā)生在梯度線形變化的時候,而在低波長下基本不可避免。因為色譜常用的甲醇和乙腈在低波長(如210nm)下是有吸收的,如果基線隨著有機(jī)相不斷增多而上漂或者隨著有機(jī)相的不斷減少而下漂,這不僅是正?,F(xiàn)象,還反映了系統(tǒng)的靈敏性和性。所以這個問題無法消除,只能通過選擇更的有機(jī)溶劑來降低基線漂移的程度,如乙腈的工業(yè)污染物為丙酮(有的紫外吸收),選擇更的乙腈可以地降低梯度漂移的程度。
    (3)梯度鬼峰
    這個問題可以一分為二,梯度鬼峰有偶然情況和必然情況兩種。
    偶然情況為流動相未經(jīng)良好脫氣,溶解氧能與某些有機(jī)溶劑形成有紫外吸收的絡(luò)合物,而出現(xiàn)的吸收,此種情況沒有重復(fù)性,可以通過良好的流動相脫氣而避免。
    可能還有些問題這里未能總結(jié),得通過化學(xué)工作者不斷去發(fā)現(xiàn)和總結(jié),遇到問題解決問題是化學(xué)工作者的基本工作,實事求是是化學(xué)工作的基本要求。
    必然情況即隨著梯度運行形成一些莫名其妙的峰,并且有*的重復(fù)性,不可避免,一般發(fā)生在梯度有大的變化的時候。遇到這樣的情況不要擔(dān)心,做一個梯度空白對照,只要梯度鬼峰不影響樣品的出峰即可。

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